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            上海信帆生物:干擾素(IFN)生物學活性檢測

            更新時間:2016-05-13      瀏覽次數:1144

            干擾素(IFN)根據其產生細胞不同和理化性質、犐z物學特性的差異可分為α干擾素(IFN-α)、β干擾素(IFN-β)和γ-干擾素(IFN-γ)。它們在機體免疫調節、抗病毒感染中具有重要作用。檢測IFN的方法主要分為定量測定(常用elisa)和生物學活性的檢測,后者較為常用。 
              (一)原理 
              干擾素能刺激某些指示細胞(如人羊膜上皮細胞Wish株、人喉癌細胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺單層細胞)產生抗病毒蛋白,從而使細胞免受水皰性口炎病毒(VSV)的攻擊,根據待測樣品不同稀釋度的保護能力,計算出干擾素生物學活性單位。 
              (二) 操作步驟 
                    96孔培養板中加入不同稀釋度的IFN和標準IFN, 
                    每個稀釋度設3孔,每孔50μl,病毒對照不加IFN 
                              ↓ 
                      每孔加入100μl 1.5~2×105/ ml Wish 
                      或Hep-2細胞懸液,37℃、CO孵箱培養6~12h, 
                      使細胞貼壁為單層 
                              ↓ 
                      每孔加入50μl含100個 TCID50 VSV, 
                     細胞對照不加病毒液 
                              ↓ 
                      根據細胞病變狀態,終止培養前3~4h 
                      加入5mg/ml MTT, 15μL/孔 
                              ↓ 
                      加入適量生理鹽水,用滴管輕輕吹吸 
                      棄去懸浮病變細胞和死細胞 
                              ↓ 
                      200μl/孔 二甲亞砜(DMSO),作用10min 
                              ↓ 
                      測OD(570nm),表示活細胞中含甲 的量, 
                      也可用剛果紅攝入法、結晶紫染色法 
                         測定IFN對活細胞的保護水平 
              計算: 
              以保護半數(50%)細胞免受病毒損害的zui高干擾素稀釋度為1個干擾素活性單位。也可從標準曲線中求得待測樣品的IFN活性單位。 
              (三) 試劑和器材 
              1. VSV 
              2. WISH、HeP-2細胞株或人胚肌皮或肺單層培養物。 
              3. MTT

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