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            兔抗綿羊紅細胞(溶血素)實驗操作步驟說明

            更新時間:2023-10-26      瀏覽次數:1692

             利用綿羊細胞與相應抗體(溶血素)結合成的復合物,可激活血清中的補體,導致紅細胞溶解,當紅細胞和溶血素量一定時,在規定反應的時間內,溶血程度與補體量及活性呈正相關。在接近50%溶血(CH50)時,二者之間近似直線關系,故以50%溶血作為最敏感的判斷終點。以引起50%溶血所需的最小補體量為一個 CH50U,可計算出待測血清中總的補體溶血活性,以 CH50U /ml表示。

             

            產品全稱:凍干兔抗綿羊紅細胞(凍干溶血素)

            規格:0.5ml*10

            效價:1:4000

            批號:20230511

            保存:-20℃,避光保存,避免反復凍融

            有效期:12個月

            使用方法:臨用前,每瓶加去離子水或者雙蒸水0.5ml重建后立即使用(10小時內),不得反復使用。

            相關實驗測定步驟:(僅供參考)

             

            本試驗主要反映補體經典活化途徑的溶血功能,其結果與補體C1~C9各組成分的量及活性均有關。
            1.試劑及配制
            (1)緩沖生理鹽水:
            貯存液:
             Na2HPO4·12H2  2.85g

            KH2PO4           0.27g (加蒸餾水至100毫升,4保存)
             NaCl             17.00g

            應用液(緩沖液):5毫升貯存液加95毫升蒸餾水,再加10%硫酸鎂0.1毫升。當日配制。12小時內使用。
            (2)2%綿羊紅細胞:無菌采取綿羊血液,于等量Alsever中可保存3周。用前以緩沖液
            3次,并配成2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標準化。
            (3)溶血素:將本品(效價1:4000),用緩沖液做1:2000倍稀釋(即1ml溶血素加1999毫升緩沖液)。
            (4)待測血清:新鮮血液室溫放置30分鐘,再4放置60分鐘,使血塊收縮。4離心
            (3000r/min )10分鐘,取上清,-20保存。
            2.試管法操作步驟(改良 Mayer 法)
            (1)致敏羊紅細胞:2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素(1:2000),混勻,置37水浴30分鐘。

            (2)稀釋血清:待測血清0.2ml,加緩沖液3.8ml,稀釋度為1:20。
            (3)配制溶血標準管:2%綿羊紅細胞2ml8ml蒸餾水,混勻,即為全溶血管。取全溶血管液2ml加緩沖液2m1,即為50%溶血管。
            (4)按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置37水浴30分鐘。第10管為非溶血對照。


                         補體 CH50 測定試管法

             

            成分

            試管號

            1

            2

            3

            4

            5

            6

            7

            8

            9

            10

            1:20待測血清

            0.10

            0.15

            0.20

            0.25

            0.30

            0.35

            0.40

            0.45

            0.50

            -

            緩沖液(ml

            1.40

            1.35

            1.30

            1.25

            1.20

            1.15

            1.10

            1.05

            1.00

            1.50

            致敏紅細胞(ml

            1

            1

            1

            1

            1

            1

            1

            1

            1

            1

             

            (5)結果測定:取出試管,2000r/min 離心10分鐘,對照管應不溶血。肉眼比色,選與
            50%溶血標準管相近二管,再用分光光度計測(波長542nm0.5cm比色杯OD 值,確定與標準管最接近者為終點管,然后按下公式計算CH50值:血清補體CH50 ( U /ml)=(1/血清用量)稀釋度。
            如第5管為終點管,測待測血清中 CH5066.7U/ml 。血清補體CH50正常值為50-100U/ ml 。